新(xīn)聞中(zhōng)心
微生物(wù)和細胞生長(cháng)的光密度(OD)測量是微生物(wù)學(xué)及生物(wù)發酵實驗室中(zhōng)最常用(yòng)的方法之一,用(yòng)于在進行蛋白表達或監測培養過程時确定收獲的最佳時間。細胞、細菌或酵母在液體(tǐ)培養基中(zhōng)的生長(cháng)情況(細胞密度、細菌生長(cháng)、酵母生長(cháng))通常通過測量600nm下的光密度(OD600)來獲得。OD600測量通常用(yòng)于确定細菌培養物(wù)的生長(cháng)階段,這些測量有(yǒu)助于确保在适當的細胞密度下收獲細胞。
由于OD600測量的光密度是由光散射而非光吸收引起的,因此細胞的大小(xiǎo)和形狀以及死細胞和碎片可(kě)能(néng)會增加光散射。因此,當在相同的儀器上測量時,處于相同密度水平(如Cells/mL)的不同細胞類型可(kě)能(néng)顯示出不同的OD600值。
朗伯-比爾定律與OD600
OD600讀數的差異
OD600校正值公(gōng)式
NanoPhotometer®或OD600 DiluPhotometer™等儀器默認“校正系數”為(wèi)1,如使用(yòng)相應方法進行調整,将有(yǒu)助于在不同設備之間提供可(kě)比較的結果。
OD600校正因子= 設備1測量值 / 設備2測量值
通常建議使用(yòng)試管或比色皿進行OD600測量,以确保讀數的穩定性,較大體(tǐ)積樣品提供了更大的濁度平均值,誤差相對較小(xiǎo)。此外,為(wèi)了防止菌體(tǐ)沉降過快,并給出随時間變化的OD讀數,可(kě)向樣品中(zhōng)添加甘油。對于一些很(hěn)小(xiǎo)的樣品量要求,使用(yòng)微滴進行測量,也是可(kě)行的,特别是NanoPhotometer®的樣品壓縮法,在液膜中(zhōng)測量,可(kě)避免液柱中(zhōng)顯著的沉降現象。但需注意在上樣前樣品的充分(fēn)混勻。
用(yòng)于測量的儀器的線(xiàn)性範圍對于覆蓋培養物(wù)的整個生長(cháng)周期至關重要,建議至少2.5 OD的OD限值以提供足夠的工(gōng)作(zuò)範圍。如果存在大量的死細胞,使結果模糊不清,則樣本可(kě)能(néng)在整個範圍内不是線(xiàn)性的。如果樣品仍然超出範圍,則可(kě)能(néng)需要稀釋;應仔細選擇參數以覆蓋整個所需區(qū)域,而不影響測量的線(xiàn)性度。
為(wèi)了減少OD600測量所需的體(tǐ)積,并避免耗時且容易出錯的手動稀釋,可(kě)以使用(yòng)特殊的比色皿。Implen的DiluCell™自動稀釋比色皿可(kě)降低樣品體(tǐ)積要求,并提供自動虛拟樣品稀釋。由于DiluCell™的獨特設計,光路從标準的10毫米減少到1毫米(DC 10)。根據朗伯-比爾定律,光程因子為(wèi)10。使用(yòng)DiluCell™自動稀釋可(kě)節省時間,并排除稀釋誤差和交叉污染。
德(dé)國(guó)Implen提供多(duō)種OD600測量解決方案,包括應用(yòng)于基礎測量和高級工(gōng)藝開發的不同機型,具(jù)有(yǒu)可(kě)靠的測量結果和豐富的軟件功能(néng),以及合規性功能(néng),能(néng)夠充分(fēn)滿足不同用(yòng)戶的需求。OD600測量,認準德(dé)國(guó)Implen。