視網膜

視網膜是眼球中(zhōng)重要的結構之一，它是位于眼球壁内層的一層透明薄膜，周圍布滿了大量的感光細胞和神經纖維，通過它可(kě)以直接接受來自外界環境的光線(xiàn)并在眼球内形成影像，通過神經纖維将影像信息傳送至大腦中(zhōng)樞形成視覺。

其它中(zhōng)樞神經系統内也有(yǒu)小(xiǎo)膠質(zhì)細胞，在健康的視網膜中(zhōng)，神經元和小(xiǎo)膠質(zhì)細胞之間的交流對維持神經元向大腦發送信号的能(néng)力非常重要。

視網膜血管作(zuò)為(wèi)人體(tǐ)内可(kě)以進行非創傷直接觀察的深層微血管，其生理(lǐ)狀況的檢查對高血壓、糖尿病、動脈硬化等心血管疾病的診斷、治療評價具(jù)有(yǒu)重要意義。

一般而言，眼底圖像通常都是通過激光掃描成像進行采集，但是由于眼底可(kě)觀測的視野往往是很(hěn)有(yǒu)限的，一個患者的眼底信息需要多(duō)張掃描圖像才能(néng)完全顯示出來。這種局限性大大不利于病情進行全面的、細緻的診斷。Tissue Cytometry全景組織流式定量分(fēn)析技(jì )術進行全景圖像獲取，在單細胞、組織結構、細胞空間信息等多(duō)個層面進行定位、定性、定量分(fēn)析。從而更好的對病變區(qū)域進行有(yǒu)針對性的跟蹤觀察和全面分(fēn)析。

實驗目的

視網膜熒光樣本中(zhōng)小(xiǎo)膠質(zhì)細胞胞體(tǐ)、神經纖維識别、血管識别、血管斑點識别、神經元與血管的距離分(fēn)析。

實驗流程

1. 利用(yòng)TissueFAXS系統進行玻片熒光的全景掃描。

2. 使用(yòng)StrataQuest分(fēn)析軟件進行定量分(fēn)析。

3. 根據FITC通道識别神經胞體(tǐ)并篩選出細胞胞體(tǐ)（細胞核識别算法）。

4. 膜識别FITC染色信号的區(qū)域确定神經纖維，并對不同長(cháng)度神經纖維進行分(fēn)類。

5. 識别血管的Texa Red染色區(qū)域面積及強度。

6. 計算神經元與血管間的空間距離，并統計數量和占比。

7. 根據毛細血管亮斑的識别結果，統計新(xīn)生小(xiǎo)血管數量。

實驗過程

單通道灰階圖（↑：FITC，↓：Texa Red）

根據染色強度，染色面積，細胞形态學(xué)，利用(yòng)正反向回溯功能(néng)和設門圈選Gating，排除雜質(zhì)，細胞碎片，黏連細胞（綠色框線(xiàn)标記），獲得神經元胞體(tǐ)，（粉色框線(xiàn)标記），并将胞體(tǐ)按照面積分(fēn)為(wèi)兩類（散點圖）。

由于該視網膜樣本是标記的小(xiǎo)膠質(zhì)細胞，根據面積将神經胞體(tǐ)分(fēn)為(wèi)兩類（Small bodycell，Big bodycell），反向回溯Big bodycell中(zhōng)的細胞後，應用(yòng)Input Gate功能(néng)篩選短粗的神經纖維，作(zuò)為(wèi)激活态的小(xiǎo)膠質(zhì)細胞。

激活态小(xiǎo)膠質(zhì)細胞識别

血管識别：根據Texa Red通道進行識别，并去除面積小(xiǎo)的及非同一焦面的血管，僅對确定的清晰的同一焦面的大血管進行面積統計。

血管與小(xiǎo)膠質(zhì)細胞的距離

血管與小(xiǎo)膠質(zhì)細胞的距離0-0.1μm（紅色框線(xiàn)标記）

血管與小(xiǎo)膠質(zhì)細胞的距離0.1-1μm（粉色标記）

血管與小(xiǎo)膠質(zhì)細胞的距離1-3μm（粉色标記）

此外，Tissue Cytometry散點圖-熱力圖-數據同屏疊加對比功能(néng)，可(kě)以整合多(duō)種數據分(fēn)析的二維圖像，便于研究者們直觀的對比與校驗；同屏對比功能(néng)，不但可(kě)以同屏預覽，還可(kě)以支持多(duō)點實時聯動縮放，便于觀察/分(fēn)析圖像，打通信息分(fēn)析時數據-圖像之間的屏障。